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ARCHIVOS LATINOAMERICANOS DE NUTRICION Vol. 61 No 2, 2011
Organo Oficial de la Sociedad Latinoamericana de Nutricion
Maria Isabel Giacopini, Omaira Guerrero, Manuel Moya, Virgilio Bosch.
Instituto de Medicina Experimental, Facultad de Medicina, Universidad Central de Venezuela.
Universidad Pedagogica Experimental Libertador, Caracas - Venezuela
poproteinas oxidadas (LDLox, HDLox) desempena un
papel causal e importante en la aterogenesis (2-4). La
susceptibilidad de la LDL a la oxidacion viene determinada
por diversos factores endogenos y exogenos
(5). Entre estos ultimos, los factores nutricionales revisten
especial importancia, como los tipos de acidos
grasos y compuestos antioxidantes de la dieta (6).
Estudios realizados en animales y en pacientes hipercolesterolemicos,
senalan que el consumo de dietas
ricas en acidos grasos monoinsaturados (AGMI) y pobres
en acidos grasos poliinsaturados (AGPI),enriquecen
la LDL con acido oleico y resultan lipoproteinas
mas resistentes a la oxidacion y producen menos die-
INTRODUCCION
El aumento de la velocidad de generacion de especies
reactivas de oxigeno, unido a una disminucion de
los mecanismos de defensa antioxidantes, conduce a
un aumento en la concentracion de radicales libres
(RL), o estres oxidativo, que constituye la base de la
hipotesis oxidativa de la aterosclerosis (1). Estudios
experimentales en modelos animales, epidemiologicos
e investigaciones clinicas apoyan la hipotesis de que
los cambios conformacionales de las lipoproteinas de
baja densidad (LDL) y de alta densidad (HDL) son
causadas por la peroxidacion lipidica, y que estas li-
SUMMARY. Comparative study of the consumption of
virgin olive oil or seje on lipid profile and oxidation resistance
of high density lipoprotein (HDL) of rat plasma.
We compared the effect of the consumption of seje oil
(Oenocarpus bataua), with that of olive oil, on plasma lipids
and susceptibility in vitro to oxidation of high density lipoprotein
(HDL) in the rat. Two groups of ten male Sprague
Dawley rats were fed ad libitum, for a lapse of eight week,
with a purified diets with 10g de seje oil or olive oil/ 100 g
of diet (GS y GO respectively). The animals were exsanguinated
at the end of the experimental after a 14 hour fast.
Plasma was isolated by centrifugation, and the fractions of
lipoproteins were separated from the plasma by sequential
ultracentrifugation. Rats of GO had a statistically significant
lower in concentration of TG (p<0.05) compared with GS
group. HDL fractions in both groups were oxidatively modified
by incubation with copper ions. Differences in the
fractions susceptibilities to peroxidation were studied by
measuring the formation of thiobarbituric acid reactive
substance (TBARS) for 3 hours. HDL in GS had a statistically
significant decrease in TBARS formation (p<0.05) relative
to HDL of GO. This may be explained by the lower
concentration of polyunsaturated fatty acids of HDL in GS
compared with HDL in GO.
Key words: Oenocarpus bataua oxidation of lipoprotein,
seje oil.
RESUMEN. Nosotros comparamos los efectos del consumo
de aceite de seje (Oenocarpus bataua), con respecto el de
oliva virgen sobre la concentracion de los lipidos del plasma
y de la susceptibilidad de oxidacion in vitro de las lipoproteinas
de alta densidad (HDL) en la rata Sprague Dawley.
Dos grupos de 10 ratas macho, fueron alimentados ad libitum
por un lapso de 8 semanas, con una dieta purificada que
contenia 10g aceite de seje u oliva/100 g de dieta (GS y GO
respectivamente). Se extrajo la sangre a los animales previo
ayuno de 14 horas. El plasma fue aislado por centrifugacion,
y las fracciones de lipoproteinas se separaron por ajuste de
densidad y ultracentrifugaciones sucesivas. Las HDL de
ambos grupos fueron oxidadas por incubacion con iones
cobre. La diferencia de susceptibilidad de oxidacion de las
HDL fue estudiada midiendo la formacion de sustancias reactivas
al acido tiobarbiturico (TBARS) a las 3 horas. Las
ratas del GO presentaron una disminucion estadisticamente
significativa en la concentracion de los trigliceridos TG
(p<0.05) comparada con las ratas del GS. Las HDL del GS
experimentaron una disminucion estadisticamente significativa
de la susceptibilidad de oxidacion de las HDL respecto
las HDL GO. Esto puede ser atribuido a la mas baja concentracion
de acidos grasos poliinsaturados (AGPI) en las
HDL GS comparado con las HDL del GO.
Palabras clave: Oenocarpus bataua, Oxidacion de lipoproteinas,
aceite de seje, aceite de oliva.
Estudio comparativo del consumo de aceite de oliva virgen o
seje sobre el perfil lipidico y la resistencia a la oxidacion de las
lipoproteinas de alta densidad (HDL) del plasma de rata.
143
grupos de 10 ratas/grupos (GS- GO) y alimentados ad
libitum por un lapso de ocho semanas.
La composicion de la dieta experimental se muestra
en la Tabla 1. La dieta de cada uno de los grupos
contiene 10g/100 de aceite, siendo las fuentes de acidos
grasos los siguientes aceites: Grupo Seje (GS):
aceite crudo de seje extraido mediante un procedimiento
artesanal, que data de epocas anteriores a la
conquista europea (14); de La Esmeralda, Druida Marahuaca,
y Grupo Oliva (GO): aceite de oliva virgen
comercial (Caracas, Venezuela). El consumo de la
dieta y peso de los animales fue controlado diariamente
durante el periodo que duro el experimento.
Indices de calidad.
Para las determinaciones de acidez y peroxidos, se
siguio la metodologia descrita en los reglamentos: de
la Comision Venezolana de Normas Industriales (COVENIN),
a las muestras de los aceites se les determino:
acidez libre oleica (titulacion volumetrica,
COVENIN, 1996b) e indice de peroxidos (COVENIN,
1998) (15-16)
Determinacion de la concentracion de tocoferoles
en los aceites.
La determinacion de los tocoferoles en los aceite,
se hizo por cromatografia liquida (HPLC), segun el
metodo de la AOCS, Ce 8-89 (17).El equipo empleado
para la separacion y cuantificacion de los tocoferoles
fue un cromatografo de liquidos con un detector de
arreglo de diodos marca Perkin Elmer modelo 235C,
y una columna marca Alltech fase normal silica, 250
mm x 4,6 mm x 5 micrones. La fase movil que se empleo
en la separacion fue una mezcla de n-hexano-
TABLA N‹1
Composicion de la dieta experimental.(g/100g)
Componentes Composicion
Caseina 22.47
Almidon de maiz 57.53
Aceite (Seje u Oliva) 10.0
Bitartrato de colina 0.2
Mezcla de minerales (AIN) 3.5
Mezcla de vitaminas (AIN) 1.0
DL-metionina 0.3
Recomendaciones de American Institute of Nutrition (AIN)
nos conjugados (DC), peroxidos de lipidos (PL) , o
malondialdehido(MDA), respecto a LDL ricas en
AGPI. Esto se atribuye a que los AGPI poseen mayor
numero de dobles enlaces susceptibles al ataque de los
(RL), iniciadores de la reaccion en cadena de peroxidacion
lipidica (7-8)
Ademas, recientes investigaciones han determinado
que el consumo de aceite de oliva rico en acido
oleico, AGMI, tiende a reducir el riesgo cardiovascular
relacionado con la concentracion plasmatica de TG,
LDL-C, la relacion LDL-C: HDL-C, y la susceptibilidad
de oxidacion de las LDL. (9-11)
Estas observaciones reafirman la importancia de
las grasas de la dieta para la prevencion de ECV, donde
ha de considerarse el aceite de oliva como un componente
nutricional importante de la misma, por su alto
contenido de AGMI y de compuestos con propiedades
antioxidantes.
En este sentido, estudios realizados sobre las caracteristicas
quimicas, fisicas y perfil de acidos grasos
(AG) de diferentes tipos de aceites de consumo humano
en Venezuela, detectaron que un aceite extraido
por etnias venezolanas de la pulpa del fruto de una
palma silvestre denominada Oenocarpus bataua, anteriormente
denominada Jessenia bataua (12), y llamada
comunmente en Venezuela gsejeh, (13), presenta
una alta concentracion del acido oleico (80 g/100), lo
que lo asemeja al aceite de oliva (14)
A pesar, que el aceite de seje posee caracteristicas
fisico-quimicas y composicion de AG similares al
aceite de oliva, que permiten recomendarla para consumo
humano, no se dispone de informacion cientifica
sobre |
su efecto sobre factores de riesgo
cardiovascular. Siendo el proposito de esta investigacion,
comparar el efecto del consumo del aceite de
seje con respecto el aceite de oliva, sobre el perfil lipidico
y la susceptibilidad de oxidacion in vitro de la
fraccion HDL de plasma de rata, con la finalidad de
definir su utilidad desde el punto de vista de aceite
con actividad antioxidante
MATERIALES Y METODOS
Animales y dietas.
En este estudio se utilizaron un total de 20 ratas
machos de la cepa Sprague Dawley, con un peso promedio
de 200 } 20 g de peso. Los animales fueron colocados
en jaulas individuales, y separados en dos
144 GIACOPINI et al.
de HDL (n=10/Grupo) aisladas son desalinizadas (7).
La concentracion de proteinas, se determino de
acuerdo al metodo de Lowry modificado por Shacterlec
y Pollack (22). La oxidacion de las HDL se indujo
por la adicion de CuSO4 (7ƒÊM) segun metodo de Thomas,
C., y col (23). A las 3 horas, se determino el grado
de oxidacion de las HDL in vitro por el metodo propuesto
por Kosugi, H y col (24). Los resultados son
expresados como nmoles de SRTBA/mg de proteina.
Determinacion del Indice de Peroxidabilidad (IP)
A partir de la composicion de AG se calculo Indice
de Peroxidabilidad (IP), el cual refleja la susceptibilidad
de peroxidacion considerando el potencial de oxidacion
de cada AG. (25)
IP= (% AGMI*0.025)+ (% acido dienoico*1) + (%
de AG trienoico* 2) + (%AG tetraenoico *4) + (% AG
pentaenoico *6) + (% AG hexaenoico* 8)
Analisis estadistico.
Los resultados son presentados como promedios }
desviacion estandar (D.E.). Se utilizaron para el analisis
estadistico de las variables estudiadas, la prueba
ANOVA de un factor, y la comparacion de las medias
por la prueba de Turkey, considerandose significativo
un valor de "p" inferior a 0,05.
RESULTADOS.
El peso promedio de las ratas alimentadas con las
dietas que contenian 10 g/100 de aceite de seje u oliva,
despues de las ocho semanas, fue 409}16 y 427} 12 g
respectivamente, no se observo diferencia significativa
en el crecimiento de las ratas entre los grupos.
Los valores de acidez en las muestras correspondientes
al aceite de seje y oliva estuvieron por debajo
del 2%, que es el maximo establecido por la Norma
para los aceites virgenes de oliva. En cuanto al Indice
de Peroxidos, los resultados mostraron valores inferiores
al limite maximo permitido por la norma COVENIN
para aceite oliva virgen (<20 meq O2 Kg-1)
(Tabla2). De los cuatro isomeros del tocoferol solo se
detecto el ƒ¿- tocoferol, siendo la concentracion en el
aceite de oliva el doble de la del aceite de seje, 22 ppm
y 11ppm respectivamente (Tabla 2).
El perfil de AG de los dos aceites indica que
ambos presentan la misma concentracion de acido
oleico, AGMI, diferenciandose en el porcentaje de los
isopropanol 99,75:0,25 (v/v) con un flujo de 1 ml/min,
y un volumen de inyeccion de 20 ƒÊL. Se empleo una
longitud de onda de de 290 nm.
Analisis de acidos grasos
Los AG se extraen de acuerdo al metodo de Folch
et al. (18). La composicion de AG fue determinada por
cromatografia gas/ liquido despues de la transesterificacion
de los AG con una mezcla metanol/tolueno
/acido sulfurico en proporcion 86:10:4 e incubados por
90 min., a 80oC. (19). El porcentaje de los metil esteres
de los acidos grasos (MAG) fueron determinados despues
de su separacion utilizando un cromatografo de
gases HP, modelo 6890 Plus GC, version A.03.07; con
una columna capilar recubierta interiormente de una
pelicula de cyanopropil 0, 2 ƒÊm, con una longitud de
100 m y un diametro interno de 0.25mm (HP-88).
Obtencion del plasma.
Despues de ocho semanas, los animales previo
ayuno de 14 horas, fueron anestesiados con Neosdonal
(Specia-Paris-Francia) por via intraperitoneal
(5mg/100 g de peso corporal) y se extrajo la sangre
por puncion cardiaca. La sangre fue colectada en tubos
con 10 ƒÊl/mL de EDTA al 10%, y centrifugada a 2000
g por 15 min a 10oC. El plasma obtenido se conservo
bajo refrigeracion a 4oC, hasta su procesamiento.
Aislamiento de las lipoproteinas del plasma.
Las diferentes fracciones de lipoproteinas del
plasma VLDL (d<1.019 gr/ml), LDL (d= 1.019 .
1.063 gr/ml) y HDL (d= 1.063 .1.021 gr/ml) fueron
separadas por ajuste de densidad con bromuro de potasio
(KBr) y ultracentrifugaciones sucesivas por 20
horas a 40.000 rpm (100000 g) y temperatura 15‹C
utilizando una ultracentrifuga marca Beckman, modelo
L5 . 55, y un rotor Spinco 50 Ti, como se ha descrito
anteriormente (20).
Determinacion de las variables bioquimicas
Se realizaron las determinaciones de trigliceridos
totales y colesterol total y en las fracciones VLDL,
LDL, y HDL por metodos enzimaticos-colorimetricos
INVELAB.
Determinacion del grado de oxidacion.
Se determino el grado de oxidacion del plasma y
de las HDL previo a la oxidacion (21). Las fracciones
ESTUDIO COMPARATIVO DEL CONSUMO DE ACEITE DE OLIVA VIRGEN O SEJE 145
significativa entre la concentracion de TG del GO respecto
al GS (p<0.05). No se detectaron sustancias reactivas
con el acido tiobarbiturico (SRTBA), en el
plasma y en las fracciones de HDL de las ratas post
periodo experimental (resultados no mostrados). En la
Tabla 5 se observa la marcada diferencia entre los valores
promedios } DE (p< 0.05), de la concentracion
de los productos de oxidacion de las HDL de los GS y
GO a las 3 horas de inducida la reaccion con CuSO4.
DISCUSION
El aceite de seje presento un valor de indice de acidez
y de peroxidos inferiores a los valores permitidos
por la Norma para el aceite de oliva virgen, asi como
un Indice de Peroxidabilidad menor lo que indica una
mayor estabilidad frente a la oxidacion que el aceite
de oliva.
La diferencia de concentracion del acido araquidonico
(C20:4 n-6) y docosahexanoico (C22-6 n-3) de
las HDL de ambos grupos, obedece a la diferencia de
concentracion en las dietas de los precursores de estos
AG, el acido linoleico (C18:2, n-6) y el ƒ¿- linolenico
AGPI linoleico y linolenico. El aceite de seje presenta
una relacion de W6/W3 de 6.04}0.33 a 13.06}0.38
en el aceite de oliva, proporcion que se mantiene en la
dieta y en la fraccion de HDL (Tabla 3). Un hecho notorio
es que la concentracion de acido araquidonico es
menor en las HDL del GS respecto al GO y por lo
tanto el IP de las HDL del GS es menor que el de las
HDL GO (Tabla 3).
Los lipidos al final del estudio se muestran en la
Tabla 4. Se observo, una diferencia estadisticamente
TABLA 2
Caracteristicas quimicas de los aceites de seje
y oliva virgen
Caracteristica Aceite de Seje Aceite de Oliva (V)
Indice de Acidez
(% Ac. Oleico) 0,70 } 0,03 0,46 } 0,03
Indice Peroxido
(meq/Kg) 4.5}0.02 12.0 }0.08
ƒ¿- tocoferol (ppm) 11.0 22.0
Acidez aceite de oliva virgen 1 a 2% Ac. Oleico
Indice Peroxido de aceite de oliva virgen <20
TABLA N‹ 3
Composicion de los acidos grasos de los aceites- dietas y HDL de las Ratas. (g/100g)
Aceites Dietas HDL
AG Seje Oliva Seje Oliva GS GO
16:00 8.43}0.09* 11.38}0.04 11.81}0.15 11.98}0.3 26.88}0.40 26.65}0.16
18:00 3.13}0.01 3.54}0.06 3.06}0.03 3.75}0.04 11.25}0.21 11.28}0.09
18: 1 Cis 81.18}0.06 81.01}0.01 75.06}1.41 74.07}0.02 35.23}0.46 34.90}0.21
18: 2 n-6 2.85}0.18* 8.29}0.02 3.69}0.09* 7.52}0.10 3.38}0.08* 7.60}0.04
18: 3n-6 1.42}0.15* 0.46}0.01 0.13}0.01* 0.44}0.02 0.50}0.10 0.61}0.01
18:3 n-3 0.67}0.04 0.74}0.01 0.71}0.00 0.71}0.01 0.14}0.00 0.14}0.00
20:4 n-6 ------ ------ ------ ------ 2.86}0.04* 6.72}0.04
20:5 n-3 ------ ------ ------ ------ ------- 0.12 }0.02
22: 6 n-3 ------ ------ ------ ------ 0.46}0.00 0.42}0.01
ƒ°AGS 11.56}0.01 14.89}0.01 16.81}0.08 15.73}0.02 45.40}0.7* 41.28}0.26
ƒ°AGMI 81.18}0.06 81.01}0.01 75.06}1.41 73.07}0.01 35.20}1.7 34.90}0.21
ƒ°AGPI 4.94}0.01* 10.41}0.08 4.52}0.08* 8.66}0.13 7.34}0.1* 14.94}0.08
W6/W3 6.04}0.33* 13.06}0.38 5.19}0.08* 11.28}0.06 13.56}0.73* 25.91} 0.48
IP 9.10}0.60* 13.65}0.06 7.23}0.04* 11.67}0.16 22.65}0.20* 39.07}0.16
Los valores de AG de los aceites y de las dietas representan la media } DE (n= 3)
Los valores de las HDL representan la media } DE de tre |
s mezclas de (n= 9)
* Indica que existe diferencia significativa p<0.05
IP es el Indice de Peroxidabilidad calculado a partir de la composicion de AG.
146 GIACOPINI et al.
TABLA 4
Concentracion de lipidos en el plasma de las ratas
(mg /dL)
Grupo C total Trigliceridos VLD-C LDL-C HDL-C
Seje
53.8 }
9.5
51.2 }
11.9*
3.6 }
0.5*
3.3 }
1.0
25.5 }
6.5
Oliva
54.0 }
13.3
39.6 }
9.6
2.6 }
2.7
3.4 }
2.4
22.2 }
5.1
Los valores representan el promedio } DE (n = 10 por grupo)
(*) Indica que existen diferencias estadisticamente significativas
entre los dos grupos, establecidos mediante la prueba ANOVA
siendo significativo a p < 0,05.
TABLA 5
Grado de oxidacion de la fraccion HDL de plasma
de rata con dieta al 10% aceite seje u oliva a las
3horas (nmoles TBARS/ mg de proteina)
GRUPO Seje Oliva
Grado de Oxidacion (3horas) 4 } 0.94* 14 } 5.92
Los valores representan el promedio } DE (n = 10 por grupo)
* Indica que existen diferencias estadisticamente significativas entre los
grupos, establecidos mediante la prueba ANOVA,
siendo significativo a p < 0,05.
igual al aceite de oliva, presenta una menor relacion
w6/w3 lo cual conduce a lipoproteinas con una concentracion
menor de linoleico y araquidonico. Esto
nos hace pensar que el consumo de aceite de seje
puede producir metabolitos con menos actividad inflamatoria
que el aceite de oliva.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen el apoyo financiero recibido
del CDCH (P.I 09-5621-2007). Asi como la colaboracion
de la Dra. Julia Flores por la orientacion prestada
en la realizacion del mismo. Al Especialista de Servicios
Analiticos Alexis Reyes del Laboratorio de Servicios
Analiticos de Alimentos Polar por la
determinacion de tocoferoles en los aceites utilizados
en la dieta.
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9. Bonanome A, Pagnan A, Biffanti S, Opportuno A, Sor-
(18:3, n-3) respectivamente. Este resultado concuerda
con evidencias de que la sintesis de estos AG esta influenciada
por la cantidad y la relacion de (C18:2, n-
6) / (C18:3, n-3) en la dieta (26).
La disminucion de la concentracion de los TG por
el consumo de aceite de oliva virgen es consistente con
estudios previos. Se ha demostrado que el aceite de
oliva contribuye a modular los procesos metabolicos
relativos a la secrecion y al transporte de trigliceridos.
(27) Ademas, existen evidencias de que el aceite de
oliva genera lipoproteinas intestinales ricas en trigliceridos
que se metabolizan con rapidez (28)
La ausencia de TBARS en el plasma y las fracciones
de HDL de ambos grupos despues del periodo experimental,
nos permite concluir que hay un balance
oxidativo/ antioxidativo en plasma y HDL antes de
inducir la reaccion de oxidacion. Un hallazgo muy notorio
e importante de este trabajo es en la menor susceptibilidad
a la oxidacion in vitro de las HDL del GS,
en comparacion a las HDL GO (p<0.05). Todo esto
muy de acuerdo con las diferencias que existen en
cuanto al contenido de AGPI e IP de las dietas utilizadas
y las HDL (7-9).
Estos resultados indican que el aceite de seje, a
pesar de poseer una concentracion de acido oleico
ESTUDIO COMPARATIVO DEL CONSUMO DE ACEITE DE OLIVA VIRGEN O SEJE 147
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